Plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp72 (h): sc-402689

Présentation

PDIA4 code pour ERp72, un membre de la famille des isomérases disulfure protéiques résidant dans le réticulum endoplasmique (RE), qui catalyse des réactions d’échange thiol–disulfure afin de soutenir le repliement oxydatif et le contrôle qualité des protéines sécrétées et membranaires. ERp72 fonctionne au sein du réseau de protéostasie du RE aux côtés des chaperonnes et d’autres PDI, contribuant à la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), à la dégradation associée au RE (ERAD) et au maintien de l’homéostasie rédox en conditions de stress du RE. En modulant la maturation des protéines clientes et en limitant le stress protéotoxique, PDIA4 influence des voies liées à la sécrétion, au traitement des antigènes et à l’adaptation cellulaire aux perturbations du repliement protéique. Une capacité de repliement du RE dérégulée et un stress chronique du RE sont impliqués dans la biologie des cancers, les maladies métaboliques et les processus neurodégénératifs, ce qui fait de PDIA4 un point d’entrée utile pour des études mécanistiques de la signalisation du stress et du contrôle qualité du protéome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp72 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDIA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDIA4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDIA4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ERp72.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDIA4 pour l'étude de la signalisation de ERp72, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDIA4 essentiels à la fonction de ERp72
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDIA4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ERp72 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ERp72 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDIA4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ERp72 plasmide HDR (h) et le ERp72 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDIA4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDIA4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.