Plásmido Doble Nickase (h) ERp57: sc-401497-NIC

PDIA3 codifica ERp57, un miembro de la familia de las isomerasas de disulfuro de proteínas que actúa en el retículo endoplásmico para catalizar la formación y la isomerización de enlaces disulfuro durante el plegamiento de glicoproteínas. ERp57 coopera con calnexina y calreticulina en el control de calidad del RE, favoreciendo la maduración de proteínas secretadas y de membrana y su integración con la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR) y las vías de degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD). Más allá del plegamiento proteico, ERp57 contribuye a la presentación de antígenos mediante la carga de péptidos en el MHC de clase I e influye en procesos de señalización regulados por el estado redox. La desregulación de la proteostasis y de las funciones inmunitarias dependientes de PDIA3/ERp57 se ha asociado con fenotipos de estrés celular y se estudia en contextos como la neurodegeneración, el estrés metabólico y la biología del cáncer.

ERp57 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PDIA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PDIA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PDIA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PDIA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.