Plásmido Doble Nickase (h) ERM: sc-401161-NIC

ETV5 codifica el factor de transcripción ERM de la familia ETS, una proteína nuclear de unión al ADN que regula programas de expresión génica implicados en decisiones de destino celular, proliferación y migración. ERM actúa aguas abajo de la señalización de receptores tirosina cinasa, incluidas las vías FGF/MAPK, e integra señales del desarrollo y de la remodelación tisular controlando la transcripción de dianas asociadas al crecimiento y la diferenciación. La actividad desregulada de ETV5 se ha vinculado con dinámicas epitelio‑mesénquima alteradas, estados transcripcionales asociados a la invasión y plasticidad de linaje en múltiples contextos de enfermedad, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la reconfiguración de redes transcripcionales. Como regulador específico de secuencia, ERM también sirve como un modelo manejable para investigar la cooperatividad entre factores ETS, el uso de potenciadores (enhancers) y el control de la transcripción dependiente de la cromatina.

ERM El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ETV5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ETV5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ETV5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ETV5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.