Plásmido CRISPR de Activación (h) ERM: sc-401161-ACT

El gen humano **ETV5** codifica el factor de transcripción **ERM** de la familia ETS, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que integra señales extracelulares para controlar programas génicos que gobiernan la proliferación, la diferenciación y la migración celular. ERM actúa aguas abajo de la señalización de receptores tirosina cinasa, incluidas las vías **FGF–MAPK/ERK**, y contribuye a la especificación de linaje y a la remodelación tisular mediante el control transcripcional de estados del desarrollo y similares a células madre. La actividad desregulada de **ETV5/ERM** se ha asociado con alteraciones en la diferenciación epitelial y endocrina, y con frecuencia se vincula a redes transcripcionales oncogénicas en múltiples contextos tumorales. Estas propiedades hacen de ETV5 un nodo útil para estudiar la circuitería transcripcional impulsada por ETS, el uso de potenciadores dependiente de señales y la regulación génica específica del contexto en modelos celulares humanos.

ERM El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ETV5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ERM El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ETV5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ETV5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ERM. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ETV5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ERM en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ERM en células tumorales con expresión de ETV5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.