Particules Lentivirales d'Activation (h) ERK 5: sc-400891-LAC

MAPK7 code pour ERK5, une kinase MAP atypique activée en aval de MEK5, qui intègre des signaux mitogènes et de stress afin de réguler la transcription, la prolifération, la différenciation et la survie cellulaire. La signalisation d’ERK5 s’articule avec les cascades MAPK et module l’activité de facteurs de transcription tels que MEF2, façonnant des programmes liés au remodelage du cytosquelette, à la migration et aux réponses angiogéniques. Une activité dérégulée de la voie MAPK7/ERK5 a été associée à des altérations du contrôle de la croissance et de la signalisation inflammatoire dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment dans des modèles d’oncogenèse et de biologie vasculaire. Par conséquent, MAPK7 constitue un nœud utile pour disséquer les interactions entre voies, l’expression génique dépendante du stimulus et la dynamique de signalisation adaptative dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ERK 5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MAPK7 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ERK 5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MAPK7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ERK 5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MAPK7 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.