Erg CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420226-ACT

Mouse Erg kodiert einen Transkriptionsfaktor der ETS-Familie, der an GGAA/T-Kernmotive bindet und Genprogramme reguliert, die die endotheliale Spezifikation, vaskuläre Stabilität sowie die Erhaltung hämatopoetischer Stamm- und Vorläuferzellen steuern. Erg integriert Signale aus angiogenen und zytokinresponsiven Signalwegen, darunter VEGF-gesteuerte endotheliale Transkriptionsnetzwerke sowie eine über MAPK/PI3K verknüpfte Regulation des transkriptionellen Outputs. Eine fehlregulierte ERG-Aktivität ist intensiv als Bestandteil onkogener transkriptioneller Schaltkreise untersucht, insbesondere bei hämatologischen Malignomen und in ETS-getriebenen Fusionskontexten, in denen veränderte Zielgenexpression Proliferation, Differenzierung und Zellidentität beeinflusst. In Mausmodellen wird Erg häufig genutzt, um Linienfestlegung, Gefäßbiologie und die Abhängigkeit von Transkriptionsfaktoren in der normalen Entwicklung sowie in krankheitsrelevanten Zellzuständen zu untersuchen.

Erg Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Erg-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Erg Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Erg-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Erg-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Erg-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Erg-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Erg-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Erg-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Erg-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.