Particules Lentivirales d'Activation (h) Erg-1/2/3: sc-400404-LAC

ERG code pour un facteur de transcription de la famille ETS qui régule des programmes d’expression génique contrôlant le maintien des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques, la différenciation endothéliale et l’intégrité vasculaire. Par une liaison à l’ADN spécifique de séquence, ERG intègre des signaux issus de voies telles que MAPK/ERK et PI3K/AKT afin de moduler la prolifération, la survie, l’adhérence et l’engagement de lignée. Une activité d’ERG dérégulée est fortement associée à une reprogrammation transcriptionnelle oncogénique, notamment les réarrangements TMPRSS2–ERG dans le cancer de la prostate et une expression aberrante d’ERG dans les leucémies aiguës. Ces caractéristiques font d’ERG un nœud moléculaire largement utilisé pour étudier le contrôle transcriptionnel, l’état de la chromatine et les réseaux de spécification de lignée dans des modèles de cancer et de biologie vasculaire.

Les particules d'activation lentivirales Erg-1/2/3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ERG dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Erg-1/2/3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ERG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Erg-1/2/3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ERG ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.