eRF3a Double Nickase Plasmid (h): sc-404748-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das eRF3a Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- eRF3a Double-Nickase-Plasmid (h) und eRF3a Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GSPT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eRF3a Double Nickase Plasmid (h) | sc-404748-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eRF3a Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404748-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **GSPT1** kodiert **eRF3a**, einen Faktor der Translationstermination, der zusammen mit **eRF1** einen funktionellen Komplex bildet, um die **GTP-abhängige Freisetzung der Peptidkette** an Stoppcodons zu fördern und das **Ribosomen-Recycling** zu koordinieren. Über die Termination hinaus ist eRF3a an **mRNA-Überwachungswegen** wie dem **nonsense-mediated mRNA decay (NMD)** beteiligt und beeinflusst die **Proteostase**, indem es die Dynamik der Translation mit der **Proteinqualitätskontrolle** verknüpft. Die GSPT1-Aktivität ist in **Zellzyklusregulation** und **stressresponsive Translationsprogramme** eingebunden, und eine veränderte Expression wurde in mehreren krebsrelevanten Kontexten mit **proliferativen Phänotypen** in Verbindung gebracht. Als zentraler Knotenpunkt für **Translationsfidelität** und **mRNA-Umsatz** wird eRF3a häufig untersucht, um Mechanismen der **Stoppcodon-Erkennung**, **Transkriptstabilität** und **Wachstumskontrolle** zu analysieren.
eRF3a Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GSPT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GSPT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GSPT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GSPT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.