ErbB4/HER4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420220

Übersicht

Erbb4 kodiert die Rezeptor-Tyrosinkinase ErbB4/HER4, ein Mitglied der EGFR/ErbB-Familie, das Neureguline und andere EGF-ähnliche Liganden bindet, um die Zell-Zell-Signalübertragung zu regulieren. Nach ligandinduzierter Dimerisierung aktiviert ErbB4 nachgeschaltete Signalkaskaden, darunter PI3K–AKT, RAS–RAF–MEK–ERK, JAK–STAT und PLCγ/PKC, und steuert so Programme der Proliferation, des Überlebens, der Differenzierung und der Migration. In Mausgeweben ist ErbB4 besonders wichtig für die Neuroentwicklung und synaptische Signalübertragung sowie für die Epithel- und Herzbiologie, wo es zu wachstumsfaktorgetriebener Musterbildung und Homöostase beiträgt. Eine fehlregulierte ErbB4-Signalgebung und veränderte Wechselwirkungen zwischen Signalwegen wurden mit krebsassoziierten Signalnetzwerken und neurologischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was ErbB4 als mechanistischen Knotenpunkt für Signalweg- und Genotyp-Phänotyp-Studien unterstützt.

Das ErbB4/HER4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Erbb4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Erbb4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Erbb4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ErbB4/HER4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Erbb4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ErbB4/HER4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Erbb4-Exone abzielen, die für die ErbB4/HER4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Erbb4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ErbB4/HER4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ErbB4/HER4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Erbb4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ErbB4/HER4 HDR-Plasmid (m) und ErbB4/HER4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Erbb4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Erbb4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.