ErbB3/HER3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420219
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ErbB3/HER3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ErbB3/HER3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ErbB3/HER3 Anticuerpo (G-4): sc-7390
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ErbB3/HER3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-420219 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Erbb3 codifica la tirosina quinasa receptora ErbB3/HER3, un miembro de la familia EGFR/ErbB que forma heterodímeros de manera preferente con ERBB2 para transducir señales de factores de crecimiento. A pesar de su limitada actividad quinasa intrínseca, ErbB3 aporta múltiples sitios de anclaje para PI3K y acopla con fuerza la estimulación por ligando a la señalización PI3K–AKT, con crosstalk adicional hacia procesos regulados por MAPK/ERK y mTOR. En células de ratón, ErbB3 contribuye a programas de desarrollo y homeostasis tisular, influyendo en la diferenciación epitelial, la supervivencia y la migración mediante el tráfico del receptor y la regulación por retroalimentación. La señalización ERBB desregulada en la que participa HER3 se estudia con frecuencia en contextos de remodelación oncogénica de redes de receptores y de adaptaciones de señalización tipo resistencia, lo que convierte a Erbb3 en un nodo común para el análisis de vías.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ErbB3/HER3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Erbb3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Erbb3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Erbb3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ErbB3/HER3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Erbb3 para la investigación de la señalización de ErbB3/HER3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Erbb3 críticos para la función de ErbB3/HER3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Erbb3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ErbB3/HER3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ErbB3/HER3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Erbb3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ErbB3/HER3 (m) y el plásmido HDR ErbB3/HER3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Erbb3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Erbb3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.