ErbB3/HER3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420219

Panoramica

Erbb3 codifica la tirosin-chinasi recettoriale ErbB3/HER3, un membro della famiglia EGFR/ErbB che forma preferenzialmente eterodimeri con ERBB2 per trasdurre i segnali dei fattori di crescita. Nonostante la limitata attività chinasica intrinseca, ErbB3 offre molteplici siti di docking per PI3K e collega in modo robusto la stimolazione da ligando alla segnalazione PI3K–AKT, con ulteriori interazioni con i processi regolati da MAPK/ERK e mTOR. Nelle cellule murine, ErbB3 contribuisce ai programmi di sviluppo e di omeostasi tissutale, influenzando la differenziazione epiteliale, la sopravvivenza e la migrazione attraverso il traffico recettoriale e la regolazione a feedback. La segnalazione ERBB deregolata che coinvolge HER3 è frequentemente studiata in contesti di rimodellamento oncogenico delle reti recettoriali e di adattamenti di segnalazione tipo-resistenza, rendendo Erbb3 un nodo comune per l’analisi delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ErbB3/HER3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Erbb3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Erbb3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Erbb3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ErbB3/HER3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Erbb3 per lo studio della segnalazione di ErbB3/HER3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Erbb3 critici per la funzione di ErbB3/HER3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Erbb3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ErbB3/HER3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ErbB3/HER3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Erbb3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ErbB3/HER3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ErbB3/HER3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Erbb3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Erbb3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.