Plasmide Double Nickase (m) ERAP1: sc-429840-NIC

La protéase murine ERAP1 (Erap1) est une métallopeptidase à zinc résidente du réticulum endoplasmique qui raccourcit des précurseurs de peptides antigéniques jusqu’à des longueurs optimales pour leur chargement sur les molécules du CMH de classe I, modulant ainsi l’immunopeptidome et la reconnaissance par les lymphocytes T CD8+. Au-delà du traitement antigénique, ERAP1 contribue au contrôle qualité des protéines du RE et peut influencer les réponses au stress du RE via ses rôles dans la gestion des peptides et la protéostasie. Des variations de l’activité d’ERAP1 ont été associées à une dérégulation immunitaire et à des phénotypes inflammatoires, faisant d’Erap1 une cible utile pour étudier les voies de présentation de l’antigène et les réseaux de signalisation immunitaire. Dans des modèles murins, la perturbation d’Erap1 soutient des recherches mécanistiques sur des processus pertinents pour l’auto-immunité et l’infection, sans préjuger de retombées cliniques.

ERAP1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Erap1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Erap1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Erap1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Erap1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.