Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ERAP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403804-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ERAP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ERAP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ERAP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ERAP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ERAP1: sc-271823
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ERAP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403804-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERAP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403804-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Endoplasmatisches Retikulum-Aminopeptidase 1 (ERAP1) ist eine zinkabhängige M1-Aminopeptidase, die antigene Peptidvorläufer auf optimale Längen zurechtschneidet, damit sie auf MHC-Klasse-I-Moleküle geladen werden können. Dadurch formt sie das zelluläre Immunopeptidom und beeinflusst die Erkennung durch CD8+-T-Zellen. ERAP1 wirkt an der Schnittstelle zwischen Proteinprozessierung im ER und Antigenpräsentation und agiert im MHC-I-Weg nachgeschaltet an den proteasomalen Abbau sowie den TAP-vermittelten Peptidtransport. Variationen der ERAP1-Aktivität können die Auswahl des Peptidrepertoires und die Schwellen für Immun-Signalgebung verändern und werden daher mit einer immunogenetischen Anfälligkeit in mehreren entzündlichen und autoimmunen Kontexten in Verbindung gebracht – insbesondere im Zusammenspiel mit bestimmten HLA-Klasse-I-Allelen. ERAP1 wird außerdem hinsichtlich Rollen in ER-stressnahen Prozessen und der Modulation der angeborenen Immunantwort untersucht, bei denen das Peptid-Trimmen die Immunüberwachung beeinflusst.
ERAP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ERAP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ERAP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ERAP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ERAP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.