Plasmide Double Nickase (h) EphB4: sc-401122-NIC

EPHB4 code le récepteur tyrosine kinase EphB4, un médiateur clé de la signalisation dépendante du contact via les ligands éphrine‑B, qui coordonne le positionnement cellulaire, la formation de frontières et la morphogenèse vasculaire. Lors de l’engagement par une éphrine, EphB4 déclenche une signalisation bidirectionnelle qui recoupe les voies des GTPases de la famille Rho, Src/FAK, PI3K–AKT et MAPK afin de réguler la dynamique du cytosquelette, l’adhérence et la migration. L’activité d’EphB4 est étroitement liée à la biologie endothéliale et à la spécification artérioveineuse, et la dérégulation de la signalisation EPHB4–éphrine a été associée à des comportements angiogéniques altérés et à des phénotypes invasifs dans de multiples contextes pathologiques, notamment le cancer et les malformations vasculaires. Ces propriétés font d’EPHB4 une cible largement utilisée pour des études mécanistiques de la communication cellule‑cellule, du développement des vaisseaux et de la signalisation du microenvironnement.

EphB4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPHB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPHB4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPHB4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPHB4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.