Plasmide CRISPR/Cas9 KO EphB2 (m): sc-420199

Présentation

Ephb2 code pour EphB2, une tyrosine kinase réceptrice du système de signalisation ephrin–Eph, qui assure une communication dépendante du contact entre cellules voisines. Lors de la liaison à des ligands ephrin‑B ancrés à la membrane, EphB2 déclenche une signalisation bidirectionnelle qui régule le remodelage du cytosquelette, l’adhésion cellulaire et la migration directionnelle, avec des rôles majeurs dans le guidage axonal, l’organisation des synapses et la formation des frontières tissulaires. Dans des modèles murins, la signalisation dépendante d’EphB2 influence l’assemblage des circuits neuronaux et la mise en place du réseau vasculaire, et a été associée à des phénotypes impliquant une modification du positionnement cellulaire et un comportement invasif. Une activité d’EphB2 dérégulée est fréquemment étudiée dans le contexte d’anomalies du développement et de voies liées au cancer qui contrôlent la motilité et la compartimentation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EphB2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ephb2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ephb2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ephb2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EphB2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ephb2 pour l'étude de la signalisation de EphB2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ephb2 essentiels à la fonction de EphB2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ephb2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le EphB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le EphB2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ephb2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le EphB2 plasmide HDR (m) et le EphB2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ephb2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ephb2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.