Plásmido Doble Nickase (m) EphA7: sc-420197-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)EphA7 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EphA7 (m) y el plásmido de doble nickasa EphA7 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Epha7. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EphA7 Anticuerpo (E-7): sc-393973
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) EphA7 | sc-420197-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) EphA7 | sc-420197-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Epha7 codifica EphA7, una tirosina cinasa receptora de la familia ephrin–Eph que media señalización dependiente del contacto para regular el posicionamiento celular, la formación de límites y la guía axonal durante el desarrollo. Tras la unión del ligando ephrin, EphA7 activa vías que involucran GTPasas de la familia Rho, señalización MAPK y remodelación del citoesqueleto, dando forma a programas de migración y adhesión. En el sistema nervioso, EphA7 contribuye al ensamblaje de circuitos neuronales y a la organización sináptica, y la alteración de la señalización Eph/ephrin se ha vinculado con defectos en el patrón neurodel desarrollo y con una arquitectura tisular desregulada. Dado que los receptores Eph también influyen en decisiones de proliferación y diferenciación, Epha7 se estudia con frecuencia en contextos donde la comunicación célula–célula y la organización espacial afectan fenotipos relevantes para la enfermedad.
EphA7 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Epha7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Epha7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Epha7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Epha7 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.