Plasmide Double Nickase (h) EphA5: sc-403104-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) EphA5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide EphA5 Double Nickase (h) et le plasmide EphA5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EPHA5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EphA5 Antibody (8B10B1): sc-517242
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) EphA5 | sc-403104-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) EphA5 | sc-403104-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA5 code pour EphA5, une tyrosine kinase réceptrice du système de signalisation des éphrines-A, qui régit la communication dépendante du contact entre cellules voisines. EphA5 module le guidage axonal, la formation des synapses et le raffinement des circuits neuronaux via une signalisation bidirectionnelle influençant le remodelage du cytosquelette, l’adhésion et le trafic endocytique. Parmi les voies en aval couramment associées aux récepteurs Eph figurent les GTPases de la famille Rho, MAPK/ERK et des nœuds de signalisation liés à PI3K, qui intègrent des signaux guidant la migration et la dynamique des neurites. Des altérations de la régulation d’EPHA5 et un déséquilibre des voies des éphrines ont été associés à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à des rôles dépendants du contexte dans des processus oncogéniques tels que l’invasion et la formation de frontières entre cellules, ce qui soutient des études mécanistiques dans des modèles neuronaux et cancéreux.
EphA5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPHA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPHA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPHA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPHA5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.