Plásmido Doble Nickase (h) EphA2: sc-400535-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)EphA2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EphA2 (h) y el plásmido de doble nickasa EphA2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EPHA2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EphA2 Anticuerpo (C-3): sc-398832
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) EphA2 | sc-400535-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) EphA2 | sc-400535-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA2 codifica EphA2, una tirosina quinasa receptora de la familia de las efrinas que media la señalización dependiente del contacto para regular la adhesión celular, la repulsión y la formación de límites. La activación de EphA2 dependiente de ligando y su comunicación cruzada con las vías PI3K–AKT, MAPK/ERK, las GTPasas Rho y la adhesión focal influyen en la dinámica del citoesqueleto, la migración y la proliferación. En contextos epiteliales y endoteliales, EphA2 contribuye a la arquitectura tisular y a las respuestas angiogénicas, y la expresión o señalización alteradas se han asociado con crecimiento desregulado y fenotipos invasivos en múltiples modelos de enfermedad. Estas propiedades hacen de EPHA2 un nodo útil para analizar la señalización de quinasas receptoras, la comunicación célula–célula y la remodelación impulsada por el microambiente.
EphA2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EPHA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EPHA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EPHA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EPHA2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.