Plásmido Doble Nickase (m) EphA1: sc-420191-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)EphA1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EphA1 (m) y el plásmido de doble nickasa EphA1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Epha1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) EphA1 | sc-420191-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) EphA1 | sc-420191-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Epha1 del ratón codifica la tirosina quinasa receptora EphA1, un miembro del sistema de señalización Eph/efrina que media la comunicación dependiente de contacto entre células vecinas. La activación de EphA1 regula la agrupación del receptor y la fosforilación de tirosinas para controlar la remodelación del citoesqueleto, la adhesión celular y la migración direccional, influyendo en la formación de límites y el patrón tisular durante el desarrollo. La señalización aguas abajo converge con las GTPasas de la familia Rho y con vías asociadas a MAPK/ERK que modulan la motilidad celular y las respuestas de crecimiento. La actividad desregulada de EphA1 se ha relacionado con alteraciones en la organización epitelial y fenotipos asociados a la invasión, lo que convierte a Epha1 en un locus útil para estudiar mecanismos relevantes para la biología tumoral y las interacciones con el microambiente en modelos murinos.
EphA1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Epha1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Epha1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Epha1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Epha1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.