Plásmido CRISPR de Activación (h) EP2: sc-401464-ACT

PTGER2 codifica el receptor humano de prostaglandina E2 (EP2), un receptor acoplado a proteína G que señala principalmente a través de Gs para elevar el AMPc intracelular y activar programas transcripcionales dependientes de PKA/CREB. EP2 integra las señales de prostaglandina E2 en vías que controlan la inflamación, el tono vascular, la función de barrera epitelial y la remodelación tisular, con comunicación cruzada aguas abajo con la señalización MAPK y PI3K de manera dependiente del tipo celular. La desregulación de la señalización PTGER2/EP2 se ha vinculado con cambios en la activación de células inmunitarias y la producción de citocinas, y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología de la inflamación crónica, procesos asociados a la fibrosis y la señalización del microambiente tumoral.

EP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTGER2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTGER2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTGER2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTGER2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EP2 en células tumorales con expresión de PTGER2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.