Plásmido CRISPR de Activación (h) EP1: sc-402565-ACT

PTGER1 codifica el receptor humano de prostaglandina E2 EP1, un receptor acoplado a proteína G que se acopla preferentemente a Gq/11 para aumentar el Ca2+ intracelular y activar la señalización dependiente de PKC. EP1 integra señales de prostanoides aguas abajo de las vías de la ciclooxigenasa para regular el tono del músculo liso, el transporte iónico epitelial y las respuestas neuroinflamatorias, con comunicación cruzada adicional con MAPK y programas de transcripción dependientes de calcio. La señalización alterada de PTGER1/EP1 se ha estudiado en la remodelación tisular impulsada por la inflamación y en la sensibilización al dolor, y se ha implicado en la regulación dependiente del contexto de la proliferación y la migración celulares. Estas características hacen de EP1 un nodo útil para explorar redes de señalización sensibles a PGE2 y cambios posteriores en la expresión génica en modelos celulares humanos.

EP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTGER1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTGER1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTGER1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTGER1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EP1 en células tumorales con expresión de PTGER1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.