Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) Ep-CAM: sc-400220-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Ep-CAM consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Ep-CAM (h) y el plásmido de doble nickasa Ep-CAM (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EPCAM. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ep-CAM Anticuerpo (C-10): sc-25308
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Ep-CAM | sc-400220-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Ep-CAM | sc-400220-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPCAM codifica la molécula de adhesión celular epitelial (Ep-CAM), una glicoproteína transmembrana enriquecida en las uniones epiteliales que favorece la adhesión homotípica célula–célula y el mantenimiento de la arquitectura epitelial. Más allá de la adhesión, Ep-CAM participa en la regulación de la proliferación y la diferenciación mediante programas de señalización que convergen con la actividad de Wnt/β-catenina y con procesos asociados a la transición epitelio-mesénquima. La alteración de la expresión de EPCAM y la variación genética se han vinculado a la biología tumoral epitelial, influyendo en la adhesión, la migración y la organización tisular en múltiples contextos de carcinoma. EPCAM también se utiliza ampliamente como marcador molecular de linaje epitelial y en investigación de células tumorales circulantes, lo que permite estudiar la identidad epitelial y la plasticidad.
Ep-CAM El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EPCAM en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EPCAM. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EPCAM. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EPCAM alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.