Plasmide CRISPR/Cas9 KO eotaxin (m): sc-422835

Présentation

Le gène murin **Ccl11** code l’éotaxine, une chimiokine de type CC qui favorise le recrutement sélectif des éosinophiles en se liant à **CCR3** et en modulant le trafic des leucocytes dans les tissus inflammés. La production d’éotaxine par les cellules épithéliales, les fibroblastes et les cellules immunitaires stimule la chimiotaxie, l’adhésion et l’infiltration tissulaire, en s’intégrant à des réseaux de cytokines tels que la signalisation **IL‑4/IL‑13** et aux programmes inflammatoires en aval régulés par **MAPK** et **NF‑κB**. **Ccl11** est largement étudié dans des modèles d’inflammation allergique des voies aériennes, de dermatite atopique et d’inflammation gastro-intestinale à éosinophiles, où l’accumulation d’éosinophiles contribue au remodelage et aux altérations de la fonction barrière. Au-delà de l’allergie, des modifications de la signalisation **Ccl11/éotaxine** ont été associées au dialogue neuro-immunitaire et à l’inflammation liée au vieillissement, ce qui en fait une cible pertinente pour des études à l’échelle des systèmes sur les pathologies pilotées par les chimiokines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO eotaxin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccl11 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccl11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccl11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine eotaxin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccl11 pour l'étude de la signalisation de eotaxin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccl11 essentiels à la fonction de eotaxin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccl11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le eotaxin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le eotaxin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccl11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le eotaxin plasmide HDR (m) et le eotaxin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccl11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccl11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.