eotaxin-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405762
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- eotaxin-3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico eotaxin-3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eotaxin-3 Anticuerpo (500-M32): sc-65349
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
eotaxin-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405762 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CCL26 codifica eotaxina-3, una quimiocina CC que se une a CCR3 para dirigir la quimiotaxis y la activación de eosinófilos, basófilos y células inmunitarias polarizadas hacia Th2. Su expresión se induce comúnmente en compartimentos epiteliales y estromales mediante la señalización de IL-4/IL-13 a través del eje JAK–STAT6, lo que la vincula a programas inflamatorios de tipo 2 y al tráfico de leucocitos. La eotaxina-3 contribuye a la regulación de la inflamación tisular, las respuestas inmunitarias asociadas a barreras y la amplificación de la red de citocinas y quimiocinas. Se han descrito alteraciones en la regulación de CCL26 y niveles elevados de eotaxina-3 en afecciones inflamatorias alérgicas y asociadas a eosinófilos, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico en la investigación de la inflamación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO eotaxin-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCL26 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCL26 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCL26 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína eotaxin-3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCL26 para la investigación de la señalización de eotaxin-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CCL26 críticos para la función de eotaxin-3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCL26 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido eotaxin-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido eotaxin-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCL26. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR eotaxin-3 (h) y el plásmido HDR eotaxin-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCL26 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCL26 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.