Plásmido Doble Nickase (m) ENX-1: sc-420259-NIC

El gen Ezh2 de ratón codifica la metiltransferasa de histonas ENX-1, el núcleo catalítico del complejo represor Polycomb 2 (PRC2), que deposita H3K27me3 para imponer un silenciamiento transcripcional estable durante el desarrollo y la especificación del destino celular. Mediante la compactación de la cromatina mediada por PRC2, ENX-1 influye en programas de compromiso de linaje, control del ciclo celular y redes génicas asociadas a la diferenciación, integrándose con reguladores epigenéticos y factores de transcripción para mantener estados de cromatina represiva. La actividad desregulada de EZH2/ENX-1 se asocia con paisajes de cromatina alterados y programas aberrantes de expresión génica observados en diversos modelos de cáncer y de biología del desarrollo, lo que la convierte en un nodo clave para estudiar el control epigenético de la proliferación y la identidad. En sistemas murinos, la perturbación de Ezh2 se utiliza ampliamente para investigar vías dependientes de Polycomb, incluido el mantenimiento de células madre, la diferenciación de células inmunitarias y la regulación génica del neurodesarrollo.

ENX-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ezh2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ezh2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ezh2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ezh2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.