Plásmido Doble Nickase (h) envoplakin: sc-405420-NIC

EVPL codifica envoplaquina, un citoligador de la familia de las plaquinas que contribuye a la envoltura cornificada y a las redes de proteínas asociadas a desmosomas en epitelios estratificados. La envoplaquina integra los filamentos intermedios con los complejos de unión para apoyar la diferenciación de los queratinocitos, la formación de la barrera y la resiliencia mecánica, interactuando con procesos de organización del citoesqueleto y de adhesión célula–célula. La alteración de la expresión de EVPL o la disrupción del ensamblaje de la envoltura se ha asociado con fragilidad epitelial y programas de diferenciación anómalos, lo que convierte a EVPL en un marcador útil y en un punto de entrada mecanístico para estudiar la homeostasis de la piel y las mucosas. En biología del cáncer, la envoplaquina y otros componentes relacionados de la envoltura se examinan con frecuencia en el contexto de la remodelación epitelial y la adhesión desregulada durante la progresión tumoral.

envoplakin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EVPL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EVPL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EVPL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EVPL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.