envoplakin Double Nickase Plasmid (h): sc-405420-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das envoplakin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- envoplakin Double-Nickase-Plasmid (h) und envoplakin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EVPL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: envoplakin: sc-137033
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
envoplakin Double Nickase Plasmid (h) | sc-405420-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
envoplakin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405420-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EVPL kodiert Envoplakin, einen Zytolinker aus der Plakin-Familie, der zur verhornten Hülle (cornified envelope) und zu desmosomenassoziierten Proteinnetzwerken in mehrschichtigen Epithelien beiträgt. Envoplakin verbindet Intermediärfilamente mit Zellkontaktkomplexen und unterstützt damit die Keratinozytendifferenzierung, die Barrierebildung und die mechanische Widerstandsfähigkeit, indem es in Prozesse der Zytoskelettorganisation und Zell-Zell-Adhäsion eingebunden ist. Eine veränderte EVPL-Expression oder eine Störung der Hüllenassemblierung wurde mit epithelialer Fragilität und aberranten Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht, wodurch EVPL ein nützlicher Marker und ein mechanistischer Ansatzpunkt für die Untersuchung der Haut- und Schleimhauthomöostase ist. In der Krebsbiologie werden Envoplakin und verwandte Hüllenkomponenten häufig im Kontext epithelialer Umbauprozesse und dysregulierter Adhäsion während der Tumorprogression untersucht.
envoplakin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EVPL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EVPL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EVPL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EVPL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.