Plasmide CRISPR/Cas9 KO envoplakin (m): sc-420248

Présentation

Chez la souris, Evpl code l’envoplakine, un cytolieur de la famille des plakines qui participe à l’assemblage et à la stabilisation de l’enveloppe cornée dans les épithéliums stratifiés. L’envoplakine sert d’échafaudage à des interactions protéine–protéine reliant les filaments intermédiaires, des composants des jonctions desmosomales et des complexes associés à la membrane, soutenant l’intégrité des barrières épidermiques et muqueuses au cours de la différenciation. Par son rôle dans l’organisation du cytosquelette et la maturation des jonctions, EVPL est couramment utilisée pour étudier l’homéostasie épithéliale, les réponses aux blessures et les processus de remodelage induits par le stress. Une expression ou une organisation altérée des protéines de l’enveloppe cornée, dont l’envoplakine, a été associée à un dysfonctionnement de la barrière et à des phénotypes cutanés inflammatoires, ce qui fait d’EVPL une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des maladies épithéliales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO envoplakin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Evpl dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Evpl, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Evpl à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine envoplakin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Evpl pour l'étude de la signalisation de envoplakin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Evpl essentiels à la fonction de envoplakin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Evpl pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le envoplakin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le envoplakin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Evpl. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le envoplakin plasmide HDR (m) et le envoplakin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Evpl pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Evpl définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.