envoplakin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420248

Descripción general

El gen Evpl de ratón codifica la envoplaquina, un citoligador de la familia de las plaquinas que participa en el ensamblaje y la estabilización de la envoltura cornificada en epitelios estratificados. La envoplaquina actúa como andamiaje de interacciones proteína–proteína que conectan los filamentos intermedios, componentes de las uniones desmosómicas y complejos asociados a la membrana, lo que sostiene la integridad de la barrera epidérmica y mucosa durante la diferenciación. Debido a su papel en la organización del citoesqueleto y la maduración de las uniones, EVPL se utiliza comúnmente para investigar la homeostasis epitelial, las respuestas a heridas y los procesos de remodelación inducidos por estrés. La expresión u organización alteradas de proteínas de la envoltura cornificada, incluida la envoplaquina, se han asociado con disfunción de la barrera y fenotipos cutáneos inflamatorios, lo que hace a EVPL relevante para estudios mecanísticos de la biología de enfermedades epiteliales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO envoplakin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Evpl en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Evpl junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Evpl tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína envoplakin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Evpl para la investigación de la señalización de envoplakin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Evpl críticos para la función de envoplakin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Evpl para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido envoplakin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido envoplakin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Evpl. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR envoplakin (m) y el plásmido HDR envoplakin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Evpl para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Evpl definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.