Plasmide Double Nickase (h) ENT4: sc-405115-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ENT4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ENT4 Double Nickase (h) et le plasmide ENT4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SLC29A4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ENT4 Antibody (SA-18): sc-101295
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ENT4 | sc-405115-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ENT4 | sc-405115-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain SLC29A4 code le transporteur nucléosidique équilibratif 4 (ENT4), un membre de la famille SLC29 qui assure le transport bidirectionnel de nucléosides et de cations organiques apparentés à travers les membranes cellulaires en fonction des gradients de concentration. L’activité d’ENT4 contribue à la récupération (salvage) des nucléosides et au métabolisme des purines, en influençant les réserves intracellulaires de nucléotides et en reliant ainsi le transport membranaire à la synthèse de l’ADN/ARN et, plus largement, à l’homéostasie métabolique. Le transport médié par ENT4 est sensible aux conditions extracellulaires et peut interagir avec des réponses au stress cellulaire qui remodèlent la demande en nucléotides et la signalisation. Des altérations de la fonction SLC29A4/ENT4 ont été étudiées dans le contexte d’une prise en charge dérégulée des nucléosides et de phénotypes induits par des métabolites, pertinents pour la recherche sur les maladies neurologiques et métaboliques.
ENT4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC29A4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC29A4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC29A4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC29A4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.