Plasmide Double Nickase (h) ENT2: sc-401952-NIC

SLC29A2 code le transporteur nucléosidique équilibratif 2 (ENT2), un transporteur de la membrane plasmique largement exprimé qui assure un flux bidirectionnel, dépendant des concentrations, de nucléosides puriques et pyrimidiques. ENT2 soutient les voies de sauvetage des nucléosides qui maintiennent les réserves de nucléotides nécessaires à la synthèse de l’ADN et de l’ARN, et contribue aux réponses cellulaires au stress métabolique en régulant la disponibilité des nucléosides extra- et intracellulaires. En modulant l’homéostasie des nucléosides, ENT2 intervient dans des processus tels que la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress de réplication et la signalisation dépendante des nucléosides dans de nombreux tissus. Les modifications de l’activité et de l’expression de SLC29A2/ENT2 ont été étudiées notamment en biologie tumorale, dans la fonction des cellules immunitaires et dans les variations liées aux transporteurs de la sensibilité cellulaire aux analogues de nucléosides, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques.

ENT2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC29A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC29A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC29A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC29A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.