Plásmido Doble Nickase (h) eNOS: sc-400127-NIC

NOS3 codifica la sintasa de óxido nítrico endotelial (eNOS), una enzima regulada por calcio/calmodulina que genera óxido nítrico a partir de L-arginina para controlar el tono vascular, la reactividad plaquetaria y las interacciones entre leucocitos y endotelio. La actividad de eNOS se integra con la señalización PI3K–AKT, la mecanotransducción del estrés de cizallamiento y la regulación posraduccional, incluida la fosforilación y el acoplamiento al equilibrio redox dependiente de tetrahidrobiopterina. La desregulación de la señalización de NOS3/eNOS se asocia con disfunción endotelial, angiogénesis alterada y vías de estrés oxidativo implicadas en la biología de enfermedades cardiovasculares y metabólicas. Como determinante central de la biodisponibilidad de óxido nítrico, eNOS se estudia ampliamente en modelos de inflamación, respuestas a la hipoxia y remodelado vascular.

eNOS El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NOS3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NOS3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NOS3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NOS3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.