Plásmido CRISPR de Activación (h) ENHO: sc-418381-ACT

ENHO codifica la hormona peptídica adropina, un factor secretado implicado en la homeostasis energética sistémica y la regulación cardiometabólica. La expresión de ENHO se ha vinculado con la detección de nutrientes y la adaptación metabólica, influyendo en la utilización de glucosa y lípidos y en programas de señalización que coordinan el metabolismo hepático, la función vascular y la fisiología del músculo esquelético. En modelos celulares, los efectos asociados a la adropina se entrecruzan con vías que regulan la función mitocondrial, las respuestas al estrés oxidativo y la señalización endotelial, lo que convierte a ENHO en un nodo útil para estudiar la reprogramación metabólica. Se han descrito niveles alterados de ENHO/adropina en contextos relevantes para la obesidad, la resistencia a la insulina, la enfermedad por hígado graso y la disfunción cardiovascular, lo que respalda su pertinencia para la investigación mecanística más que para inferencias clínicas.

ENHO El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ENHO sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ENHO El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ENHO en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ENHO, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ENHO. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ENHO y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ENHO en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ENHO en células tumorales con expresión de ENHO silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.