Endothelin-3/EDN3/ET-3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404436-NIC

EDN3はエンドセリン-3（ET-3）をコードしており、ET-3はエンドセリン受容体の分泌性血管作動性ペプチドリガンドです。とくにEDNRBを介したシグナル伝達が顕著で、神経堤細胞の遊走・増殖・分化の制御に関与します。ET-3は、PLCβ–IP3/Ca²⁺シグナル、PKCの活性化、さらに下流のMAPK/ERKプログラムなど、GPCR媒介性経路を活性化し、メラノサイトおよび腸管神経の発生に影響を与えます。発生生物学の観点では、EDN3–EDNRB軸の活性は腸管神経系の形成と色素形成の中核をなし、シグナル異常は先天性ニューロクリストパチーと関連づけられます。さらに、エンドセリンシグナルの破綻は、疾患に関連する状況において、細胞運命決定、組織パターニング、微小環境を介した細胞間コミュニケーションを研究するための機構的枠組みも提供します。

Endothelin-3/EDN3/ET-3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EDN3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EDN3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EDN3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EDN3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。