Plasmide CRISPR/Cas9 KO ENC1 (h): sc-406167

Présentation

ENC1 (ectodermal-neural cortex 1) code une protéine se liant à l’actine de la famille des répétitions kelch, qui relie le remodelage du cytosquelette aux programmes de différenciation cellulaire. Dans les cellules humaines, ENC1 a été associé à la régulation de la dynamique de l’actine, aux réponses au stress oxydatif et au contrôle, dépendant du contexte, de la prolifération et des caractéristiques de la lignée neuronale, ce qui étaye des rôles dans le développement et le maintien de l’état cellulaire. Une expression altérée d’ENC1 a été rapportée dans de nombreux types de tumeurs ainsi que dans des modèles de neurobiologie, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les voies qui couplent la signalisation redox, l’organisation du cytosquelette et les sorties transcriptionnelles. Ces propriétés font d’ENC1 une cible de recherche pour des études mécanistiques de la différenciation, de l’adaptation au stress et des phénotypes associés au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ENC1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ENC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ENC1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ENC1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ENC1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ENC1 pour l'étude de la signalisation de ENC1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ENC1 essentiels à la fonction de ENC1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ENC1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ENC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ENC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ENC1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ENC1 plasmide HDR (h) et le ENC1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ENC1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ENC1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.