Plasmide CRISPR d'Activation (m) Emx2: sc-420170-ACT

Emx2 code un facteur de transcription à homéoboîte qui contribue à établir l’identité dorsale du télencéphale et l’aréalisation corticale au cours de l’embryogenèse chez la souris, en coordonnant la prolifération des progéniteurs, la différenciation neuronale et la régionalisation. Il agit au sein de réseaux de régulation génique intégrant des signaux de morphogènes et de facteurs de croissance, notamment via des interactions avec les voies WNT/β-caténine, FGF et SHH, pour façonner le développement du prosencéphale et la formation de la frontière mésencéphale–rhombencéphale. Dans les tissus adultes, Emx2 participe à la dynamique des cellules souches neurales et à la spécification des circuits, reliant son dosage à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une organisation corticale altérée. Une expression dérégulée d’EMX2 a été associée à des malformations cérébrales du développement et a été étudiée dans le contexte de la biologie tumorale et des programmes de lignée épithéliale, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel et du destin cellulaire.

Emx2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Emx2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Emx2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Emx2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Emx2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Emx2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Emx2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Emx2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Emx2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Emx2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.