Plásmido CRISPR de Activación (h) Emx1: sc-402711-ACT

EMX1 codifica el factor de transcripción homeobox Emx1, un regulador de unión al ADN que ayuda a especificar la identidad regional y los programas de linaje neuronal durante el desarrollo del prosencéfalo y la corteza humanos. Emx1 influye en redes génicas que controlan la proliferación de progenitores, la diferenciación neuronal y la migración, integrándose con vías de señalización del desarrollo como Wnt, FGF y Notch para dar forma al patrón del neuroepitelio. La desregulación de los programas transcripcionales asociados a EMX1 se ha vinculado con trayectorias alteradas del neurodesarrollo, lo que convierte a EMX1 en un locus útil para estudiar los mecanismos de formación de circuitos corticales y la especificación del destino celular. En investigación biomédica, EMX1 sirve como factor de transcripción modelo para analizar el control potenciador–promotor, la dinámica de los estados de la cromatina y la expresión génica restringida por linaje en sistemas neurales.

Emx1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EMX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Emx1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EMX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EMX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Emx1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EMX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Emx1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Emx1 en células tumorales con expresión de EMX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.