Plasmide CRISPR d'Activation (h) Emx1: sc-402711-ACT

EMX1 code le facteur de transcription à homéoboîte Emx1, un régulateur se liant à l’ADN qui contribue à spécifier l’identité régionale et les programmes de lignée neuronale au cours du développement du télencéphale antérieur et du cortex humains. Emx1 influence des réseaux géniques qui contrôlent la prolifération des progéniteurs, la différenciation neuronale et la migration, en s’intégrant à des voies de signalisation du développement telles que Wnt, FGF et Notch pour façonner l’organisation du neuroépithélium. Des programmes transcriptionnels associés à EMX1 et dérégulés ont été liés à des trajectoires neurodéveloppementales altérées, faisant d’EMX1 un locus utile pour étudier les mécanismes de formation des circuits corticaux et de spécification du destin cellulaire. En recherche biomédicale, EMX1 sert de facteur de transcription modèle pour analyser le contrôle enhancer–promoteur, la dynamique des états de la chromatine et l’expression génique restreinte à des lignées dans les systèmes neuronaux.

Emx1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de EMX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Emx1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus EMX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription EMX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Emx1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus EMX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Emx1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Emx1 dans les cellules tumorales présentant une expression de EMX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.