Plásmido Doble Nickase (h) Emt: sc-402628-NIC

La ITK humana (cinasa de células T inducible por IL-2) codifica una tirosina cinasa no receptora de la familia Tec que transmite la señalización aguas abajo del receptor de células T, de receptores coestimuladores y de señales quimiocínicas, para modular la activación, la diferenciación y la producción de citocinas de las células T. ITK integra eventos de fosforilación proximales con la activación de PLCγ1, el flujo de calcio, la señalización MAPK y programas transcripcionales dependientes de NFAT/NF-κB/AP-1, influyendo en la formación de la sinapsis inmunológica y en la remodelación del citoesqueleto. La señalización desregulada de ITK se ha vinculado con una polarización Th2/Th17 alterada, una inmunidad antiviral deteriorada y estados anómalos de activación linfocitaria relevantes para la biología de la inmunodeficiencia y las enfermedades linfoproliferativas. Como nodo de la vía que conecta el reconocimiento de antígeno con salidas transcripcionales, ITK se estudia con frecuencia en redes de señalización inmunitaria, decisiones de linaje de células T y la interconexión de señales inflamatorias.

Emt El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITK alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.