Plásmido CRISPR de Activación (h) Elongin A3: sc-418260-ACT

TCEB3C codifica Elongin A3, un miembro de la familia Elongin A implicado en el control transcripcional por la ARN polimerasa II y en la modulación de la elongación de la transcripción. A través de interacciones con complejos de elongina y ensamblajes proteicos asociados a la transcripción, Elongin A3 se vincula con la regulación de programas de expresión génica que coordinan transiciones de estado celular, respuestas adaptativas al estrés y procesos relacionados con la proteostasis. La expresión alterada o el contexto de vías que involucran el control de la elongación y la regulación del sistema ubiquitina–proteasoma se exploran con frecuencia en biología del cáncer y otros trastornos caracterizados por desregulación transcripcional, lo que convierte a TCEB3C en un nodo útil para estudios mecanísticos. Por lo tanto, la función de Elongin A3 humana es relevante para investigar cómo se ajusta la salida transcripcional a través de vías de señalización y estados de la cromatina.

Elongin A3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TCEB3C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Elongin A3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TCEB3C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TCEB3C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Elongin A3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TCEB3C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Elongin A3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Elongin A3 en células tumorales con expresión de TCEB3C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.