Plásmido CRISPR de Activación (h) ELKS: sc-404216-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) ELKS es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) ELKS incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR ELKS (h) y el plásmido de activación CRISPR ELKS (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de ERC1. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ELKS Anticuerpo (G-10): sc-515041
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) ELKS | sc-404216-ACT | 20 µg | $397.00 |
El ERC1 humano codifica ELKS (también conocida como proteína de andamiaje de la familia Rab6-interacting/CAST), un componente central de la zona activa cortical que organiza el acoplamiento de vesículas y la exocitosis regulada. ELKS coordina ensamblajes proteicos que acoplan la señalización de pequeñas GTPasas con vías del citoesqueleto y del tráfico de membranas para favorecer una liberación eficiente de neurotransmisores y la fusión de gránulos secretores. En neuronas y células endocrinas, ELKS contribuye a la organización sináptica, a la probabilidad de liberación presináptica y a la secreción dependiente del estímulo mediante interacciones con la maquinaria de la zona activa y con componentes asociados a SNARE. Las alteraciones en la expresión o localización de ERC1/ELKS se han vinculado con una transmisión sináptica desregulada y con fenotipos neurobiológicos más amplios, lo que respalda su uso como herramienta molecular en estudios a nivel de vía sobre secreción y función de circuitos.
ELKS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ERC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
ELKS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ERC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ERC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ELKS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ERC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ELKS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ELKS en células tumorales con expresión de ERC1 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.