Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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elastin Double Nickase Plasmid (h): sc-400640-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das elastin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- elastin Double-Nickase-Plasmid (h) und elastin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ELN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: elastin: sc-166543
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
elastin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400640-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
elastin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400640-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELN kodiert Elastin, ein zentrales Protein der extrazellulären Matrix, das sich zu elastischen Fasern zusammenlagert und so in Arterien, Lunge und Haut Rückstellkraft und Belastbarkeit gewährleistet. Elastinmonomere werden sezerniert und während der Elastogenese durch Interaktionen mit mikrofibrillären Gerüststrukturen sowie eine durch Lysyloxidase vermittelte Reifung vernetzt; dies unterstützt die Gewebebiomechanik und die Mechanotransduktion. Störungen in Menge oder Organisation von Elastin beeinflussen das vaskuläre Remodeling und die Homöostase der extrazellulären Matrix und greifen in Signalwege ein, die den Phänotyp glatter Muskelzellen und die Integrität des Bindegewebes regulieren. Eine ELN-Fehlfunktion und die Fragmentierung elastischer Fasern sind mit erblichen und erworbenen Erkrankungen des Gefäß- und Bindegewebes assoziiert, wodurch ELN ein wichtiger Lokus für die Erforschung der Matrixbiologie ist.
elastin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ELN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ELN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ELN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ELN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.