Plásmido CRISPR de Activación (h) elastin: sc-400640-ACT

El gen humano **ELN** codifica la elastina, una proteína de la matriz extracelular altamente entrecruzada que aporta elasticidad y capacidad de retroceso a tejidos como la pared arterial, el pulmón y la piel. La elastina se deposita en forma de tropoelastina y se ensambla sobre andamiajes microfibrilares, acoplando la organización de la matriz con el comportamiento de las células del músculo liso, la mecanotransducción y las vías de remodelación de la matriz extracelular. La expresión de **ELN** y la integridad de las fibras de elastina influyen en la distensibilidad vascular y la homeostasis del tejido conectivo, vinculando la elastogénesis alterada con trastornos hereditarios y adquiridos caracterizados por estenosis arterial, susceptibilidad a aneurismas y laxitud dérmica. Como componente de la matriz con una vida media prolongada, la elastina se estudia con frecuencia en modelos de desarrollo, envejecimiento y cambios biomecánicos del tejido asociados a la fibrosis.

elastin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ELN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

elastin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ELN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ELN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de elastin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ELN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de elastin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía elastin en células tumorales con expresión de ELN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.