Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EKLF/KLF1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402366-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EKLF/KLF1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EKLF/KLF1 Double-Nickase-Plasmid (h) und EKLF/KLF1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KLF1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EKLF/KLF1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402366-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EKLF/KLF1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402366-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes KLF1 (EKLF) kodiert einen auf die erythroide Zelllinie beschränkten Krüppel-like-Transkriptionsfaktor, der an CACCC-Elemente bindet, um die stadienspezifische Genexpression während der Erythropoese zu koordinieren. EKLF/KLF1 reguliert die Kontrolle des Globin-Lokus, Programme der Erythrozytenmembran und des Zytoskeletts, die Hämbiosynthese sowie den Ausstieg aus dem Zellzyklus über transkriptionelle Netzwerke, zu denen unter anderem BCL11A, KLF3 und Gene der erythroiden Reifung gehören. Indem KLF1 die Chromatinzugänglichkeit und Transkription an erythroiden Enhancern und Promotoren formt, beeinflusst es den Hämoglobin-Switch und die Differenzierungspfade roter Blutkörperchen. Genetische Störungen von KLF1 stehen mit veränderter erythroider Entwicklung und Hämoglobin-Expressionsmustern in Zusammenhang und unterstreichen damit seine Relevanz für die Modellierung erblicher Erythrozyten-Phänotypen und von Mechanismen der Globinregulation.
EKLF/KLF1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KLF1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KLF1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KLF1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KLF1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.