EKLF/KLF1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402366

Descripción general

KLF1 (factor eritroide tipo Krüppel; EKLF) es un factor de transcripción con dedos de zinc que actúa como regulador maestro del compromiso con el linaje eritroide y de la maduración terminal de los glóbulos rojos. Se une a motivos CACCC para controlar programas de expresión génica específicos del eritroide, incluida la regulación de los genes de globina, la síntesis de hemoglobina, la remodelación de membrana/citoesqueleto y la coordinación de vías asociadas a la enucleación. KLF1 interactúa con la cromatina y la maquinaria transcripcional para moldear los estados de diferenciación eritroide y la adaptación metabólica durante la eritropoyesis. La alteración genética o la expresión desregulada de KLF1 se asocia con fenotipos hereditarios de los glóbulos rojos y defectos en el cambio de hemoglobina, lo que respalda su relevancia en estudios de mecanismos relacionados con la anemia y de la biología del desarrollo eritroide.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EKLF/KLF1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KLF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KLF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KLF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EKLF/KLF1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KLF1 para la investigación de la señalización de EKLF/KLF1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KLF1 críticos para la función de EKLF/KLF1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KLF1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EKLF/KLF1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EKLF/KLF1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KLF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EKLF/KLF1 (h) y el plásmido HDR EKLF/KLF1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KLF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KLF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.