Plásmido Doble Nickase (h) eIF5: sc-402133-NIC

EIF5 codifica el factor eucariota de iniciación de la traducción 5 (eIF5), un regulador central de la iniciación de la traducción que actúa como proteína activadora de GTPasa para eIF2, promoviendo el reconocimiento del codón de inicio y el ensamblaje productivo del ribosoma 80S. Al modular la hidrólisis de eIF2–GTP y la fidelidad del escaneo, eIF5 ayuda a coordinar la síntesis proteica global con las respuestas celulares al estrés y el control del crecimiento, en interacción con vías como la señalización de eIF2 y la respuesta integrada al estrés. Las alteraciones del control traduccional que involucran a eIF5 se han vinculado con una proliferación desregulada y con desequilibrios en la proteostasis, lo que convierte a EIF5 en un punto de interés para estudiar cómo la dinámica de los factores de iniciación influye en programas oncogénicos y de adaptación al estrés. En células humanas, la perturbación de EIF5 puede revelar dependencias en la reprogramación de la traducción, la iniciación específica de ciertos ARNm y la biología de los gránulos de estrés.

eIF5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.