Plásmido Doble Nickase (h) eIF4G: sc-400661-NIC

EIF4G1 codifica la proteína andamiaje eIF4G humana, un componente central del complejo eIF4F que coordina el inicio de la traducción de ARNm dependiente del cap al servir de puente entre eIF4E, eIF4A, PABP y la subunidad ribosomal 40S a través de eIF3. Al organizar el ensamblaje del complejo de preiniciación y promover el reclutamiento y el escaneo del ARNm, eIF4G integra señales de crecimiento y de estrés que modulan la producción traduccional, incluidas vías vinculadas a la síntesis proteica regulada por mTOR y a la proteostasis celular. La desregulación del inicio de la traducción y la función alterada de EIF4G1 se han estudiado en el contexto de fenotipos neurodegenerativos y, de forma más amplia, en la biología de la respuesta al estrés, donde los cambios en la traducción selectiva de ARNm pueden reconfigurar programas del estado celular. Como nodo del control traduccional, EIF4G1 se utiliza con frecuencia para investigar mecanismos que conectan el metabolismo del ARN, la homeostasis proteica y la remodelación del proteoma dependiente de señales.

eIF4G El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF4G1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF4G1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF4G1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF4G1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.