Partículas Lentivirales de Activación (h) eIF4B: sc-402494-LAC

EIF4B codifica el factor humano de iniciación de la traducción eIF4B, un regulador de la traducción de ARNm dependiente del cap que favorece el reclutamiento del complejo de preiniciación 43S y potencia la actividad helicasa de ARN dentro del eje eIF4F, facilitando el escaneo a través de regiones 5′ UTR estructuradas. Mediante la modulación de la eficiencia de traducción, eIF4B integra señales de vías de crecimiento y estrés, incluidas PI3K–AKT–mTOR y MAPK, para moldear la producción del proteoma durante la proliferación y la adaptación celular. La actividad desregulada de eIF4B se ha asociado con programas alterados de control traduccional implicados en la señalización oncogénica y fenotipos de supervivencia, y con frecuencia se estudia como un nodo que vincula redes de quinasas aguas arriba con la traducción selectiva de ARNm. Estas características hacen de EIF4B una diana útil para analizar la regulación de la traducción, el acoplamiento señalización‑traducción y la proteostasis dependiente de vías en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral eIF4B (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de EIF4B en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral eIF4B (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción EIF4B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de eIF4B. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo EIF4B y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.