Plásmido Doble Nickase (h) eIF4B: sc-402494-NIC

EIF4B codifica eIF4B, un factor accesorio de iniciación de la traducción que potencia la actividad helicasa de ARN de eIF4A y favorece el reclutamiento de ribosomas a ARNm estructurados durante la iniciación dependiente de caperuza. A través de sus interacciones con el complejo eIF4F y de la fosforilación reguladora aguas abajo de las vías de señalización PI3K–AKT–mTOR y MAPK, eIF4B ayuda a ajustar la producción traduccional durante el crecimiento, las respuestas al estrés y la progresión del ciclo celular. La expresión alterada de EIF4B o su estado de activación se han asociado con programas de síntesis proteica desregulados que contribuyen a la señalización oncogénica y a una proliferación celular aberrante. Como nodo que vincula vías de señalización con la traducción selectiva de ARNm, EIF4B se estudia con frecuencia en mecanismos que controlan la proteostasis, la dinámica de los gránulos de estrés y la regulación dependiente de la traducción de la apoptosis y el metabolismo.

eIF4B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF4B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF4B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF4B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF4B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.