Plásmido CRISPR de Activación (h) eIF4B: sc-402494-ACT

El gen humano **EIF4B** codifica **eIF4B**, un factor de iniciación de la traducción que potencia la actividad helicasa de ARN de **eIF4A** y favorece el reclutamiento del complejo de preiniciación **43S** a ARNm estructurados, aumentando así la eficiencia de la traducción dependiente del cap. **eIF4B** está regulado por señales de factores de crecimiento y nutrientes, incluidas las vías **PI3K–AKT–mTOR** y **MAPK**, mediante eventos de fosforilación que ajustan la carga de ribosomas y las tasas de síntesis proteica. Al influir en la traducción de transcritos implicados en la proliferación, las respuestas al estrés y la supervivencia, **EIF4B** contribuye a programas celulares como la progresión del ciclo celular y el control traduccional adaptativo. La actividad y fosforilación desreguladas de **eIF4B** se han asociado con una salida traduccional alterada en la biología del cáncer y otras enfermedades en las que el control de la síntesis proteica está perturbado.

eIF4B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EIF4B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

eIF4B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EIF4B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EIF4B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de eIF4B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EIF4B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de eIF4B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía eIF4B en células tumorales con expresión de EIF4B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.