Plásmido CRISPR de Activación (m) eIF2C1: sc-437349-ACT

Ago1 de ratón codifica eIF2C1, una proteína de la familia Argonaute que se une a pequeños ARN y actúa como efector central de la interferencia de ARN. eIF2C1 participa en el silenciamiento génico posranscripcional guiado por miARN y siARN, influyendo en la estabilidad y la traducción del ARNm y moldeando programas de expresión génica vinculados con la diferenciación, la proliferación y las respuestas al estrés. A través de interacciones dentro del complejo RISC y de vías relacionadas de pequeños ARN, Ago1 contribuye a la regulación epigenética y transcripcional en múltiples tejidos. La desregulación de redes de pequeños ARN dependientes de Argonaute se ha asociado con alteraciones en la señalización inmunitaria, fenotipos del neurodesarrollo y estados transcripcionales oncogénicos, lo que convierte a Ago1 en un nodo relevante para estudios mecanísticos de los circuitos de regulación génica.

eIF2C1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ago1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

eIF2C1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ago1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ago1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de eIF2C1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ago1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de eIF2C1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía eIF2C1 en células tumorales con expresión de Ago1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.