Plásmido CRISPR de Activación (h) eIF2Bβ: sc-404686-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) eIF2Bβ es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) eIF2Bβ incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR eIF2Bβ (h) y el plásmido de activación CRISPR eIF2Bβ (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de EIF2B2. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eIF2Bβ Anticuerpo (P-4): sc-9979
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) eIF2Bβ | sc-404686-ACT | 20 µg | $397.00 |
EIF2B2 codifica la subunidad β del factor eucariota de iniciación de la traducción 2B (eIF2B), el factor de intercambio de nucleótidos de guanina que regenera eIF2–GTP activo y, de este modo, sostiene la síntesis global de proteínas. eIF2B es un nodo central en el control de la traducción aguas abajo de la respuesta integrada al estrés (ISR), en la que la fosforilación de eIF2α reduce la actividad de eIF2B para reprogramar la traducción durante el estrés del RE, la limitación de nutrientes y las agresiones virales u oxidativas. Mediante esta regulación, EIF2B2 contribuye a la proteostasis, a la expresión génica adaptativa al estrés y a decisiones de destino celular vinculadas con la proliferación y la supervivencia. La disfunción de componentes del complejo eIF2B se asocia con trastornos del espectro de las leucodistrofias y se ha estudiado en el contexto de la señalización de estrés, la homeostasis neuroglial y la desregulación de la traducción.
eIF2Bβ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EIF2B2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
eIF2Bβ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EIF2B2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EIF2B2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de eIF2Bβ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EIF2B2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de eIF2Bβ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía eIF2Bβ en células tumorales con expresión de EIF2B2 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.