Plásmido Doble Nickase (h) eIF2Bα: sc-404034-NIC

EIF2B1 codifica la subunidad eIF2Bα del factor eucariota de iniciación de la traducción 2B (eIF2B), un complejo heteropentamérico que actúa como factor de intercambio de nucleótidos de guanina y regenera eIF2-GTP para sostener la síntesis proteica dependiente del cap. eIF2B integra señales de la respuesta integrada al estrés modulando la sensibilidad a eIF2α fosforilado, vinculando así la disponibilidad de nutrientes, la proteostasis y la recuperación celular del estrés del retículo endoplásmico con el control de la traducción. A través de esta función, EIF2B1 influye en las tasas globales de traducción, la dinámica de los gránulos de estrés y programas posteriores que afectan al crecimiento y la supervivencia celular. La alteración genética de subunidades de eIF2B, incluida EIF2B1, se asocia con trastornos del espectro de las leucodistrofias y ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar la regulación traduccional adaptativa al estrés en células humanas.

eIF2Bα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF2B1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF2B1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF2B1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF2B1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.