Plásmido Doble Nickase (h) eIF2α: sc-400199-NIC

EIF2S1 codifica la subunidad alfa del factor eucariota de iniciación de la traducción 2 (eIF2α), un regulador central del inicio de la traducción dependiente de cap y un nodo clave en la respuesta integrada al estrés. La fosforilación de eIF2α en Ser51 por quinasas sensibles al estrés como PERK (EIF2AK3), GCN2 (EIF2AK4), PKR (EIF2AK2) y HRI (EIF2AK1) reduce la disponibilidad del complejo ternario, atenuando de forma global la síntesis de proteínas y, al mismo tiempo, permitiendo programas de traducción selectiva. Este eje de señalización coordina la proteostasis, la adaptación al estrés del RE, la autofagia y las respuestas inmunitarias innatas a través de efectores aguas abajo, entre ellos ATF4 y CHOP/DDIT3. La señalización de eIF2α desregulada se ha implicado en contextos como la neurodegeneración, la tolerancia al estrés de células cancerosas, las respuestas a infecciones virales y el estrés metabólico, lo que convierte a EIF2S1 en un blanco ampliamente utilizado para investigar mecanismos de control translacional.

eIF2α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EIF2S1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EIF2S1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EIF2S1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EIF2S1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.